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ELISA試劑盒試驗(yàn)前做好對(duì)照很首要
更新時(shí)間:2019-04-12   點(diǎn)擊次數(shù):1400次

ELISA試劑盒試驗(yàn)固相載體的選擇:很多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。

包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),懇求純度要好,吸附時(shí)通常懇求PH在9.0~9.6之間。
吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,通常多選用4℃ 18~24小時(shí)。
有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)留心防護(hù)。
其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等。
如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。
不管何種載體,在運(yùn)用前均可進(jìn)行選擇:用等量抗原包被,在同一試驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),查詢(xún)其顯色反應(yīng)是不是均一性,據(jù)此判明其吸附功能是不是出色。
正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證試驗(yàn)作用的性。

ELISA試劑盒試驗(yàn)條件的選擇
在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)條件的選擇是很首要的,其間包括:
有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是如今較為滿(mǎn)意的供氫體。
底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)參與強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以中止反應(yīng)。
通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。
底物運(yùn)用液有必要新鮮,尤其是H2O2在臨用前參與。
然后再固定其它條件或采納“方陣法”(包被物、待檢樣品的參看品及酶符號(hào)抗體分別為不一樣的稀釋度)在正式試驗(yàn)系統(tǒng)里地滴定其工作濃度。
有時(shí)本底較高,說(shuō)明有非特異性反應(yīng),可選用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇懇求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無(wú)色。
蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不一樣的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相一起,查詢(xún)陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。
選擇OD值大而蛋白量少的濃度。關(guān)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。

ELISA試劑盒試驗(yàn)酶符號(hào)抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行開(kāi)始效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶符號(hào)抗體部份)。

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