小鼠正常肝細(xì)胞(NCTC 1469)
細(xì)胞介紹
1952年建系，源于正常C3H/An小鼠的肝臟組織，表達(dá)H-2K抗原，鼠痘病毒陰性。細(xì)胞特性
1)來源：小鼠的肝組織
2)形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3)含量：>lxl06個(gè)/mL
4)污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
細(xì)胞接受后的處理：
1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2.請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37°C培養(yǎng)約2-3h〇
3.棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4.如果細(xì)胞長(zhǎng)滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附 帶的*培養(yǎng)基。
5.接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我 們?nèi)〉秒娐?lián)。
細(xì)胞用途：僅供使用。
 
小鼠正常肝細(xì)胞(NCTC 1469)本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1.準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO);馬血清，10%;雙抗
1%。
2.培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37°C，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
2)細(xì)胞處理：
復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37°C水浴中（水面要低 于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入lmL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。 第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
 
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培
養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部 分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的 培養(yǎng)基終止消化。
輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘， 棄去上清液，加入lmL培養(yǎng)液后吹勻。
移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng) 基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
 
下面T25瓶為例；
細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，細(xì) 胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為 10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存 管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
 
小鼠正常肝細(xì)胞(NCTC 1469)注意事項(xiàng)：
收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們電聯(lián)。
所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。