絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞(B95-8)
細(xì)胞介紹
B95-8細(xì)胞株源自暴露于人白血球中抽提的EB病毒的絨猴白血球。B95-8是一個(gè)連續(xù)株并釋放高滴度的轉(zhuǎn)染EB病毒。此細(xì)胞株提供EB病毒用于建立人的連續(xù)淋巴細(xì)胞株。
 
細(xì)胞特性
1)來源：外周血淋巴細(xì)胞
2)形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣，懸浮生長
3)含量：>lxl06 個(gè)/mL
4)污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝細(xì)胞接受后的處理：
1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2.請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37°C培養(yǎng)2-3h〇
3.棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4. 如果細(xì)胞長滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5.接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉秒娐?lián)。
 
絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞(B95-8)細(xì)胞用途：僅供使用。
本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
準(zhǔn)備 RPIVM-1640 培養(yǎng)基(RPMI-1640: GIBCO)，90%;胎牛血清，10%。
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37°C，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。
凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
2)細(xì)胞處理：
復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37°C水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入lmL培
養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹句，將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將收集，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走)，加入部分新鮮培養(yǎng)基，吹打均勻后，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進(jìn)行凍存。
 
絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞(B95-8)注意事項(xiàng)：
收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們電聯(lián)。
所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。